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糟糕!又失败了!带你分析WB实验失败的12种现象及原因

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🙋 对WB实验原理一头雾水的 同学

🙋 结果条带不符合预期,却不知道原因的同学

🙋 不知道如何选择一抗、二抗的同学

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实验步骤

WB实验,是一种常用的蛋白分析技术,操作流程看似简单,但却环环相扣,实验中每一步的把握,将会直接影响结果的显现,本次课程我们将给大家展示WB实验的详细操作步骤,照着来你也可以做出漂亮的条带。

2

实验细节

细节决定成败,WB实验操作过程中的一些小细节也会对最终结果产生很大影响,WB实战视频课中,讲师会提醒你关注WB实验中最容易被忽视的关键细节,帮助你快速完成WB实验。

3

WB实验12大失败原因

Western blot的显影结果可能是千奇百怪,什么情况都可能出现, WB实战视频课整理了 12种常见的情况,并分析可能的原因,如果有遇到这些情况以外的结果,可以返回步骤反推一下原因可能出在哪里。

1.无信号——白板

一直反复实验,WB条带上却什么图像都没有,真的很让人抓狂,别急,解螺旋为你整理出可能导致白板的原因,并提供解决办法。

2.杂带太多

明明应该是一根干干净净的条带,结果却出现了很多杂带,每次看到这样的条带,都很闹心……

3.条带上有圆形的白孔

制作“三明治”时,注意要赶走气泡,不然条带上容易出现圆形的白孔。

4.缺带或者带显示不全

缺带或者带显示不全,可能是因为在一个孵育盒中孵育了多张膜,也可能是缺的那个条带所在的组表达量太低了。

5.膜上有很多杂质、黑色小颗粒

WB实验中,配置封闭液后最好静止一下,封闭牛奶一定要纯,封闭结束之前要清洗三遍之后再加一抗,不然膜上容易出现黑点和杂质。

6.高背景

一说到WB背景高,大家第一反应就是封闭没做好,然而并没有这么简单!也有可能是二抗浓度过高引起的。

7.背景脏、不规则的成片背景

WB做到最后一步,跑出的结果背景脏到不能用,真的让人心痛到不能呼吸,那么怎么让自己结果别因背景脏毁了呢?

8.“微笑”条带

微笑的WB条带,可能是凝胶制备不均匀,中间冷却不好,也可能是制胶缓冲液,电泳缓冲液及30%的丙烯酰胺缓冲液放置过久,PH发生变化。

9.拖尾条带

这种情况很容易出现,很多原因都可能导致这种情况出现,一般来说,蛋白量都是我们经过很多次摸索得出的最适蛋白量,因此不太可能是蛋白量过多引起的。

10.“牵手”条带

出现牵手条带,可能是分离胶选择不合适,或者是上样浓度太大导致样品溢出。

11.条带不在一条直线上

条带不在一条直线上,可能是因为分离不均匀或者漏液。

12.检测到的条带分子质量与预测的不符

WB实验结果还容易出现一种情况,那就是检测到的条带分子质量与预测的不符,不过一般10-15%的差距都是可以接受的。

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靠谱试剂种草

想跑出漂亮的条带图,除了实验精细化操作,选择靠谱的实验试剂同样重要!在购买WB试剂耗材的时候,我们都想选择靠谱的品牌,却经常会遇到没人可问的尴尬境地,解螺旋讲师将基于自己的实验经验教大家选择靠谱的试剂。

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